钱蕾 陈阳 皖南医学院 法医病理学教研室 安徽芜湖 241002
重楼,又名"蚤休",属华中珍稀濒危植物【1】,广泛分布于云南、四川等地,以蚤休之名始载于《神农本草经》【2】,味苦、微寒,具清热解毒、消肿止痛功效,民间多用于治疗毒蛇咬伤、流行性腮腺炎,也用于惊风抽搐.其主要化学成分有甾体皂苷、黄酮以及多糖,其中多糖具有降血压、抗氧化及免疫调节等活性,因此日益成为中药材评价指标之一.前期研究表明重楼多糖具有较好的体外活性,对其提取工艺的研究报道较少,故本实验通过热水浸提法提取重楼多糖,设计正交实验优化提取工艺,优选最佳提取条件,为重楼多糖在医药及保健领域的开发应用提供科学依据.
1 仪器、试剂与材料
1.1 仪器
小型高速粉碎机WK-2000A (青州市精诚医药装备制造有限公司) SHB-ⅢS循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司) 酶标仪 (美国Bio-TeK公司) 离心机SIGMA4K151.2 试剂与材料
重楼(安国药源商贸有限公司) 葡聚糖标准品 (色谱纯,美国Sigma-Aldrich公司)所用试剂均为分析纯,水为去离子水 三氯甲烷、正丁醇、无水乙醇
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制
采用改良蒽酮硫酸法, 以葡萄糖为标准品, 浓度为横坐标, 吸光值为纵坐标, 绘制标准曲线, 得线性回归方程:Y=3.6927X-0.0067,R2=0.9987.2.2 单因素考察
称取5份重楼粉末2g,分别按固液比1:20、1:30、1:40、1:50、1:60加入纯水,70℃提取2h,提取液补足减失重量,离心、抽滤,稀释至适当浓度用改良蒽酮硫酸法630nm测吸光度,结果提取率先增大后减小,1:30最大.称取5份重楼粉末2g,加80mL纯水,分别40、50、60、70、80℃提取2h,同法测吸光度,结果提取率先增大后减小,60℃最大.
称取5份重楼粉末2g,加80mL纯水,70℃分别提取1、1.5、2、2.5、3h,同法测吸光度,结果提取率先增大后减小,2.5h最大.
3 正交试验
结合单因素试验结果,设计三因素三水平正交试验,分别进行9组实验.结合方差分析,对多糖得率影响最大的是提取时间,最佳提取条件为,固液比1:30、提取温度60℃、提取时间2.5h,此条件下多糖得率为13.91%.
表1 L9(33)正交实验结果
表2 正交实验结果方差分析
4 结论
通过单因素分析,设计正交试验,提取时间对多糖得率影响最大,PC<0.01,因素C具有极显著性差异.通过本文研究发现:重楼多糖的最佳提取条件是,固液比1:30、提取温度60℃、提取时间2.5h.在此条件下,重楼多糖得率为13.91%.该研究结果提高了重楼多糖的提取效率,优化了提取工艺,为重楼多糖的开发利用提供科学依据.
